帽结构及加帽率检测原理

mRNA的结构主要包括 5'端帽子( cap，简称帽子) 、5'端非翻译区（untranslated region，UTR）、开放阅读框( open reading frame，ORF) 、3'端非翻译区和多聚腺苷酸尾巴 ［Poly( A) ］等结构。成熟的真核生物 mRNA的 5'端都有1个甲基鸟苷帽( m7G) 结构。加帽能够帮助mRNA 被顺利转运出细胞核，增加 mＲNA 稳定性，防止其被核糖核酸酶降解，对蛋白的表达至关重要。

加帽率检测目前采用的主要手段是先合成与5'UTR区前50nt左右相配对的含有生物素的探针，让探针和mRNA结合，然后用RNase H进行酶切，利用链霉亲和素磁珠特异性的富集带有帽子结构序列的探针，最后将探针上的含有帽子结构的序列洗脱下来，进入到LC-MS进行分析。

Poly（A）结构及Poly（A）分布检测原理

真核生物的mRNA通常在其3'端有一段腺苷，根据物种的不同，其长度从20到200多个碱基不等。最近有一些研究表明mRNA较长的尾巴可以提高翻译效率，提供mRNA的稳定性，并影响免疫反应。

目前主要采用RNase T1酶进行酶切，酶切后的Poly（A）片段用Oligo DT填料进行富集，将富集在填料上的Poly（A）片段洗脱下来后进入到 LC-MS进行分析。

第三方检测服务

质量控制作为药物开发最重要的一环，对于药物成分、杂质等的分析是药物开发过程中的重中之重。瀚海新酶提供mRNA药物第三方质检服务

■  自主建立的质量控制分析平台                        ■  mRNA加帽率检测              ■  mRNA Poly（A）分布检测                 ■  质粒分析方法开发验证

■  LNP组分含量分析方法开发验证                     ■  产品和工艺杂质研究           ■  原辅料检测                                         ■  一站式CMC整体解决方案